Hvernig þessi endonuceleases standa út
Hversu mikið veistu um takmarkanir ensím? Fáðu betri skilning á því hvað þeir gera og af hverju þau eru mikilvæg, með þessari umfjöllun.
Skilgreina takmarkanir Enzymes
Takmörkun endónukleasa er flokkur ensíms sem skera DNA sameindir. Hvert ensím viðurkennir einstaka röð núkleótíða í DNA strenginum. Slíkar röð eru yfirleitt um það bil 4 til 6 basa pör löng. Röðin eru palindromic því að viðbótar DNA strengurinn hefur aðeins sömu röð í andstæða átt.
Með öðrum orðum eru báðar þræðir DNA skorin á sama stað.
Þar sem þessi ensím eru fundin
Takmörkun ensím er að finna í mörgum mismunandi stofnum bakteríum þar sem líffræðileg hlutverk þeirra er að taka þátt í frumueyðslu. Þessar ensím "takmarka" erlenda (td veiru) DNA sem kemur inn í frumuna með því að eyðileggja það. Hýsilfruman hefur takmarkunarbreytingarkerfi sem metýlískar eigin DNA á stöðum sem eru sértækar fyrir viðkomandi takmörkunarsímana, þannig að það verndar það gegn klofnun. Meira en 800 þekktar ensím hafa fundist sem þekkja meira en 100 mismunandi núkleótíðaröð.
Notkun í líftækni
Takmörkunarsímar eru notaðir í líftækni til að skera DNA í smærri þætti til þess að kanna brot á lengdarmörkum einstaklinga (Limit fragment fragment Polymorphism - RFLP). Þeir eru einnig notaðir til genaklónunar.
RFLP tækni hefur verið notaður til að ákvarða að einstaklingar eða hópar einstaklinga hafi greinarmun á genarefnum og takmörkunarsnitamynstri á ákveðnum sviðum genamótsins.
Þekking á þessum einstaka sviðum er grundvöllur DNA fingrafarna . Hver þessara aðferða veltur á notkun agarósa hlaup rafskaut fyrir aðskilnað DNA brotin. TBE biðminni, sem samanstendur af Tris basa, bórsýru, og EDTA, er almennt notað til að nota agarósa hlaup rafskaut til að skoða DNA vörur.
Tegundir takmarkana Enzymes
Það eru þrjár mismunandi gerðir af takmörkun ensímum. Tegund I sker DNA á handahófi stöðum allt að 1000 eða fleiri grunnpar frá viðurkenningarstaðnum. Skurður af gerð III við u.þ.b. 25 grunnpör af svæðinu. Tegundir I og III krefjast ATP og geta verið stórir ensím með mörgum undireiningum. Tegund II ensím, sem aðallega er notað í líftækni, skera DNA innan viðurkenndrar röð án þess að þurfa að ATP og eru minni og einfaldari.
Takmörkunarsýkingar af tegund II eru nefnd samkvæmt bakteríusegundunum sem þau eru einangruð frá. Til dæmis var ensímið EcoRI einangrað úr E. coli . Flestir almennings þekkja útbreiðslu E. coli í matvælum.
Takmörkunarsímar af tegund II geta myndað tvær mismunandi gerðir af niðurskurðum eftir því hvort þau skera báðar þræðirnar í miðju viðurkenningarröðarinnar eða hverri strengi nær einum enda viðurkenningarröðarinnar.
Fyrrverandi skera mun búa til "ósviknar endar" án þess að ná til kjarnaálags. Síðarnefndu býr til "klífur" eða "samloðandi" endar vegna þess að hvert DNA-brot sem það leiðir hefur yfirborð sem hrósar öðrum brotum. Báðir eru gagnlegar í sameinda erfðafræði til að búa til raðbrigða DNA og prótein.
Þessi mynd af DNA stendur út vegna þess að hún er framleidd með límingu (bindingu saman) af tveimur eða fleiri mismunandi þráðum sem ekki voru upphaflega tengdir saman.