Mælingar á ensímkinetics
Sem hluti af bakgrunni eru ensím prótein sem virka sem hvatar við að draga úr magni virkjunarorku til að koma fram viðbrögð. Virkjunarorka er orkan sem er nauðsynleg til að fá viðbrögð "byrjað" þar sem margir viðbrögð koma ekki fram mjög fljótt (eða eiga sér stað á öllum) ef þau eru hitafræðilega möguleg.
Ensím hvetja til sérstakra viðbragða á tilteknu svæði (þekktur sem virkur staður) þar sem hvarfefnin bindast og hvarfast við að framleiða vörurnar. Substrates hafa virk svæði sem eru aðeins eingöngu til þeirra þannig að engin önnur efni bindast eða hvarfast á sama stað. Eins og læsa og lykill, mun hvert ensím hvetja aðeins eina tiltekna viðbrögð (með nokkrum undantekningum).
Sérstök virkni er notuð í prótein einangrun aðferðum til að tilgreina hlutfall hreinsunar. Mikilvægt er að þekkja þessa einingu þegar þú kaupir ensím til að sýna nákvæmlega hversu mikið af hreinu ensíminu sem þú ert að fá.
Þegar mælikvarði á ensíminu er mælt (svörun við ensíminu með hvarfefni eða yfirborð) er tiltekið virkni skilgreint sem magn hvarfefnisins sem ensímið breytir (hvarfað viðbrögð), á mg prótíns í ensímablöndunni, á hverja einingar tíma.
Dæmi um tiltekna starfsemi væri:
- Sértæk virkni einangraðs ensíms var mæld við 150 umól / mín / mg prótín fyrir hreinsun og 800 umól / mín / mg, eftir hreinsun.
Sérstakur virkni er mikilvægur mælikvarði á hreinleika ensíms. Mismunandi lotur af hreinu ensími ættu að hafa sömu gildi og jafnvel þynna ensímlausn mörgum sinnum mun hafa sömu ákveðnar virkni gildi jafnvel þó að mismunandi gildi ensímvirkni verði. Þetta er vegna þess að við útreikning á tiltekinni virkni eru tíðnin (einingar / ml) og nefnari (mg / ml) áhrif jafnt.
Sérstök virkni er mjög frábrugðin virkni, en útreikningur á sérstökum virkni er enn háð virkni. Þetta þýðir að tilgreint sérstakt virkni gildi mun einnig vera háð einingardeildar skilgreiningu.
Hollur ensíma sem eru lægri en búist er við tilteknu virkni gildi geta innihaldið ensím sameindir sem hafa orðið breytt eða blandað með óhreinindum.
Þættir sem hafa áhrif á ensímvirkni
Það er mögulegt að eitt ensím geti haft mismunandi mældar virkni gildi þegar mælt er í mismunandi rannsóknarstofum (það er raunverulegur munur á mældri virkni, ekki augljós munur sem stafar af notkun mismunandi einingaskilgreina).
Leiðbeiningin er framkvæmd (aðferð við prófun til að ákvarða hreinleika ensíma) mun hafa áhrif á skráð gildi virkni. Til dæmis eru ensím almennt virkari milli hitastigs 37 gráður á Celsíus samanborið við 20 gráður á Celsíus, þannig að ef prófun fer fram við 21 gráður á Celsíus, mun gildiin vera frábrugðin prófunum sem gerðar eru við 32 gráður á Celsíus (venjulega , prófanir eru gerðar við hitastig á bilinu 20-37 gráður á Celsíus).
Þannig er skilgreiningin á ensímseiningunni betur sett upp sem 1 eining (U) er magn ensíms sem hvetur hvarfinu 1 nmól af hvarfefni á mínútu við venjulegar aðstæður.