Þessi stuðpúði er notaður við rafgreiningu frá DNA
TBE stuðpúði er sérstaklega gagnlegt til aðskilnaðar á smærri DNA brotum (MW <1000), eins og lítill vara af takmörkun ensím meltingar.
TBE hefur meiri afköstunargetu og mun gefa skarpari upplausn en TAE biðminni . TAE biðminni er lausn sem samanstendur af Tris basa, ediksýru og EDTA (Tris-asetat-EDTA).
TBE er yfirleitt dýrari en TAE og hamlar DNA ligasa, sem getur valdið vandamálum ef síðari DNA hreinsunar- og ligation skref eru ætluð. Með þremur einföldum skrefum sem fylgja skaltu læra hvernig á að gera TBE biðminni. Það ætti ekki að taka meira en 30 mínútur til að búa til þessa biðminni. Hér er hvernig:
Undirbúa lagerlausn EDTA
Taka skal upp EDTA (etýlendíamín tetraediksýra) lausn fyrirfram. EDTA mun ekki fara alveg í lausn þar til pH er stillt í um 8,0. Fyrir 500 ml millilítra stofnlausn með 0,5 M EDTA vega 93,05 g af EDTA tvínatríumsalti (FW = 372,2). Þá leysa það í 400 ml afjónað vatn og stilla pH með NaOH. Síðan er lausnin upp á endanleg rúmmál 500 ml.
Undirbúa lagerlausn TBE
Gerðu þéttan (5x) stofnlausn af TBE með því að vega 54 g Tris basa (FW = 121,14) og 27,5 g bórsýru (FW = 61,83) og leysa bæði í um það bil 900 ml af afjónuðu vatni. Þá er 20 ml af 0,5 M EDTA (pH 8,0) bætt við og stillt lausnin að endanlegri rúmmál af 1 lítra.
Þessi lausn er hægt að geyma við stofuhita en botnfall myndast í eldri lausnum. Geymið duftið í glerflöskum og fargið ef botnfall hefur myndast.
Undirbúa vinnandi lausn TBE
Fyrir agarósa hlaup electrophoresis, hægt er að nota TBE biðminni í styrk sem er 0,5x (1:10 þynning á þéttu lager). Þynntu stofnlausnina með 10x í afjónuðu vatni. Lokaþéttni þéttni er 45 mM Tris-borat og 1 mM EDTA. Bufferinn er nú tilbúinn til notkunar við að keyra agarósa hlaup .
Það sem þú þarft
Til að gera TBE biðminni þarftu aðeins fjögur efni. Eftirstöðvarnir á þessum lista eru búnaður. Fjórir efnin sem krafist eru eru EDTA tvínatríumsalt, Tris basa, bórsýra og afjónað vatn.
Hvað varðar búnaðinn þarftu pH-mælikvarða og kvörðunarstaðla, eftir því sem við á. Í viðbót við það þarftu 600 millílítra og 1500 millilítra bikar eða flösku. Afrennsli búnaðarþörfanna eru útskrifaðir hylki og hrærið og hrærið.
Skoðaðu skrána í labbinu sem þú notar til að tryggja að þú hafir allt sem þú þarft áður en þú byrjar. Ekkert er verra en að þurfa að hætta í miðju að búa til lausn vegna þess að þú hefur keyrt út af rétta efninu.
Ef labið þitt er í skólanum eða vinnustaðnum skaltu athuga með rétta starfsfólki til að sjá að þau séu með öll þau atriði í lagerinu. Með því að gera það getur þú sparað þér tíma og orku í lokin.