Hvernig á að gera þetta ónæmisþynningarfræðilega litarefni
Fosfatjafnalaus saltlausn (PBS) er stuðpúðalausn sem er almennt notuð við ónæmishitokemísk (IHC) litun og er oft notuð í líffræðilegum rannsóknum. PBS er vatnslausn saltlausn sem inniheldur natríumvetnisfosfat, natríumklóríð og í sumum tilvikum kalíumklóríð og kalíumtvívetnisfosfat.
Ónæmissvörunarfræðileg litun
Immunohistochemistry vísar til ferlisins við að greina mótefnavaka eins og prótein í frumunum í vefjum með því að nota meginregluna um mótefni sem bindast sérstaklega við mótefnavaka í líffræðilegum vefjum.
Immunofluorescent staining var fyrsta immunohistochemical staining aðferð.
Mótefnavakar verða sýnilegar þegar tengdir eru við mótefni sem nota flúrljómandi litarefni vegna mótefnavaka-mótefna bindandi viðbrots. Þetta ferli kemur fram þegar það er virkjað með spennandi ljósi ákveðins bylgjulengdar undir flúrljómandi smásjá.
Osmolarity og jón styrkur lausna passa við mannslíkamann - þeir eru einfölduðir.
A Uppskrift fyrir PBS
Þú getur undirbúið PBS á nokkra vegu. Það eru margar formúlur. Sumir þeirra innihalda ekki kalíum, á meðan aðrir innihalda kalsíum eða magnesíum .
Þessi uppskrift er tiltölulega auðvelt. Það er fyrir 10X PBS stofnlausn (0.1M). Hins vegar getur þú einnig búið til 1X stofnlausn, eða byrjaðu með þessari 10X uppskrift og þynntu það í 1X.
Allt ferlið tekur um 10 mínútur.
Einnig er hægt að bæta við Tween.
Það sem þú þarft að gera PBS Buffer
- Vatnsfrítt natríumfosfat (vatnsfrítt)
- Natríumfosfat tvíbasískt (vatnsfrítt)
- Natríumklóríð
- Skala og vega báta
- Magnetic stirrer og hrærið bar
- PH-prófun sem er kvarðaður og viðeigandi lausnir til að stilla pH
- 1L mæliflösku
- Tween 20 (valfrjálst)
Hvernig á að gera fosfatbuffað saltvatn (PBS)
Vega 10,9 g vatnsfrítt natríumfosfat tvíbasískt (Na2HPO4), 3,2g vatnsfrítt natríumfosfat einbeitt (NaH2PO4) og 90g natríumklóríð (NaCl).
Leysið í rétt undir 1L eimuðu vatni.
Stilltu pH í 7,4 og látið lausnina falla upp að lokastigi 1L.
Þynntu 10x fyrir notkun og endurstilltu pH ef þörf krefur.
Þú getur búið til PBS lausn sem inniheldur 0,5 prósent Tween 20 með því að bæta 5 ml Tween 20 við 1L lausnina.
Ábendingar um gerð PBS Buffer
Geymið duftið við stofuhita eftir að þú hefur gert PBS lausnina.
Vatnsfrítt hvarfefni er hægt að skipta út en þú verður að endurreikna viðeigandi massa hvers til að mæta viðbótarsameindunum.
Notkun fosfatbuffaðs salta (PBS)
Fosfatjafnalaus saltlausn hefur marga notkun vegna þess að það er eðlilegt og ekki eitrað fyrir flest frumur. Það er hægt að nota til að þynna efni og það er oft notað til að skola ílát frumna. PBS er hægt að nota sem þynningarefni í ýmsum aðferðum til að þurrka líffræðilega einingar vegna þess að vatnsameindir innan þess verða byggðar um efnispróteinið, til dæmis. Það verður "þurrkað" og immobilized á föstu yfirborði.
PH er stöðug og samkvæm til að koma í veg fyrir eyðingu frumna.
Þunnt kvikmynd af vatni sem binst við efnið kemur í veg fyrir denaturation eða aðrar breytingar á breytingum. Carbonate biðminni er hægt að nota í sama tilgangi en með minni virkni.
Einnig er hægt að nota PBS til að taka við viðmiðunarmörk við mælingu á próteinasogs í ellipsometry.