Þessi stuðningur er notaður til að rannsaka DNA hreyfingu
Þessi biðminni hefur lágt jónstyrk og lágt dælunargetu. Það er best fyrir rafgreiningu stórra (> 20 kb) stykki af DNA og verður að skipta út oft eða endurhringa lengur (> 4 klst) hlaupstíma.
Með það í huga gætirðu viljað íhuga nokkrar lotur af biðminni.
Í ljósi þess að biðminni er auðvelt að gera og skrefarnar geta farið fram fljótt, að gera meira en eitt lotu í einu ætti ekki að vera sérstaklega tímafrekt eða erfitt að draga af. Notaðu leiðbeiningarnar hér fyrir neðan, það ætti aðeins 30 mínútur að gera TAE biðminni. Hér er hvernig:
Undirbúa lagerlausn EDTA
EDTA (etýlendíamín tetraediksýra) lausn er tilbúin fyrirfram. EDTA mun ekki fara alveg í lausn þar til pH er stillt í um 8,0. Fyrir 500 ml millilítra stofnlausn með 0,5 M EDTA vega 93,05 g af EDTA tvínatríumsalti (FW = 372,2). Leysið upp í 400 ml afjónu vatni og stillið pH með natríumhýdroxíði (NaOH). Fylltu upp lausnina í endanlegt rúmmál 500 ml.
Whip Upp Stock lausn af TAE
Gerðu þéttan (50x) stofnlausn af TAE með því að vega 242 grömm af Tris basa (FW = 121,14) og leysa það í um það bil 750 ml afjónuðu vatni.
Bætið varlega 57,1 ml af jöklsýru og 100 ml af 0,5 M EDTA (pH 8,0). Eftir það skaltu stilla lausnina á endanleg rúmmál sem er 1 lítra. Þessi stofnlausn má geyma við stofuhita. Sýrustig þessarar stuðpúðar er ekki stillt og ætti að vera um 8,5.
Búðu til vinnuaflausn TAE
Vinnulausnin með 1x TAE stuðpúða er gerð með því einfaldlega að þynna stofnlausnina með 50x í afjónuðu vatni.
Lokaþéttnistyrkur er 40 mM. Tris-asetat og 1 mM EDTA. Bufferinn er nú tilbúinn til notkunar við að keyra agarósa hlaup.
Það sem þú þarft fyrir Buffer
Þar sem TAE biðminni er aðeins nauðsynlegt þarf fljótleg og einföld leiðsögn, er fjöldi efna sem þarf til þess ekki óhóflegt. Þú þarft bara EDTA tvínatríumsalt, Tris basa og ísediksýra.
Búnaðurinn þarf einnig pH-mælikvarða og kvörðunarstaðla, eftir því sem við á. Þú þarft einnig 600 millilítra og 1500 milliliters bikar eða flöskur auk útskrifaðra hylkja. Að lokum þarftu að nota afjónað vatn, hrærið, og hrærið plöturnar.
Klára
Hvar ætlarðu að gera biðminni - á skólastað, vinnustað eða annars staðar, svo sem heima hjá þér? Athugaðu skrána áður en þú byrjar að ganga úr skugga um að þú hafir öll ofangreind efni fyrir TAE biðminni.
Ef þú vilt frekar þurfa að borga fyrir efni, er mælt með því að hætta að gera biðminni utan heimilisins. Þú getur auðveldlega pantað efni sem þú þarft á netinu eða heimsækja sérgreinavöru fyrir þá.