Hannað árið 1983, hefur PCR aðferðin gert kleift að framkvæma DNA raðgreiningu og greina röð núkleótíða í einstökum genum.
Aðferðin notar hitameðferð eða endurtekin upphitun og kælingu á hvarfinu við DNA bræðslu og afritunar. Eins og PCR heldur áfram, er "nýtt" DNA notað sem sniðmát til afritunar og keðjuverkunar ensues, sem veldur stórfelldum DNA sniðmátinu.
PCR tækni er beitt á mörgum sviðum líftækni þ.mt próteinverkfræði , klónun, réttar (DNA fingrafar), feðrapróf, greining á arfgengum og / eða smitsjúkdómum og til greiningar á umhverfisýni.
Í réttarhaldi, einkum PCR er sérstaklega gagnlegt vegna þess að það magnar jafnvel minnstu magn af DNA sönnunargögnum. PCR er einnig hægt að nota til að greina DNA sem er þúsundir ára og þessar aðferðir hafa verið notaðar til að greina allt frá 800.000 ára gamall mammóti til múmíur frá öllum heimshornum.
PCR aðferð er sem hér segir:
- Upphaf: Þetta skref er aðeins nauðsynlegt fyrir DNA-polymerasa sem krefjast upphafs PCR. Hvarfið er hitað að milli 94 og 96 ° C og haldið í 1-9 mínútur.
- Denaturation: Ef aðferðin krefst ekki frumstillingar er denaturation fyrsta skrefið. Hvarfið er hituð að 94-98 ° C í 20-30 sekúndur. Vetnisbinding DNA-sniðmátsins er truflað og einstrengdar DNA sameindir eru búnar til.
- Hreinsun: Hvarfshitastigið er lægra að milli 50 og 65 ° C og haldið í 20-40 sekúndur. The primers hreiður til einn-strandað DNA sniðmát. Hitastigið er afar mikilvægt á þessu stigi. Ef það er of heitt getur grunnurinn ekki breyst. Ef það er of kalt gæti grunnurinn bindast ófullkomlega. Gott tengsl myndast þegar grunnröðin passar nákvæmlega við sniðmátaröðina.
- Framlenging / lenging: Hitastigið á þessu stigi er mismunandi eftir tegundum fjölliða. DNA-fjölliðan myndar nýjan DNA streng.
- Endanleg lenging: Þetta skref er framkvæmt við 70-74 ° C í 5-15 mínútur eftir loka PCR hringrásina.
- Lokaleikningur: Þetta skref er valfrjálst. Hitastigið er haldið við 4-15 ° C og hvarf viðbrögðin.
Aðferðin er skipt í þrjú stig:
- Vaxtarhagkvæmni: Á hverri lotu er tvöfalt tvinn af vöru (tiltekið stykki af DNA sem er endurtaka).
- Leveling-burt stigi: Þar sem DNA fjölliðan missir virkni og eyðir hvarfefni, hægir viðbrögðin.
- Plateau: Engin meira vara safnast.