Hvaða þættir þurfa að gera með genum og klónun
Í sameindaþýðingu er vélin DNA sameind sem þjónar sem burðarefni til að flytja eða setja inn erfða gen (ir) í aðra frumu, þar sem hægt er að endurtaka og / eða gefa upp. Vigraðir eru meðal helstu verkfærin fyrir genaklónun og eru gagnleg ef þau kóða einnig einhvers konar merkisgen sem kóðar bioindicator sameind sem hægt er að mæla í líffræðilegu mati til að tryggja að þau séu sett inn og tjáð í hýsilverunni.
Sérstaklega er klónunargrein DNA tekin úr veiru, plasmíði eða frumum (af hærri lífverum) sem er sett inn með erlendu DNA broti til klónunarmarka. Þar sem klónvektarinn getur verið stöðugur viðhaldið í lífveru, inniheldur vélin einnig eiginleika sem leyfa þægilegri innsetningu eða fjarlægingu DNA. Eftir að hafa verið klóna í klónarvektor getur DNA brotið verið frekar undirklórað í aðra vektor sem hægt er að nota með enn meiri sértækni.
Í sumum tilfellum eru veirur notaðir til að smita bakteríur. Þessar vírusar eru kallaðir bakteríófag eða fag, til skamms. Retroviruses eru framúrskarandi vektorer til að kynna gen í dýrafrumur. Plasmíð, sem eru hringlaga stykki af DNA, eru algengustu vektorarnir sem notuð eru til að kynna erlend DNA í bakteríufrumum. Þeir bera oft sýklalyfjameðferð gen sem hægt er að nota til að prófa fyrir tjáningu plasmíð DNA, á sýklalyfjum petri plötum.
Gen flytja í frumur frumna er almennt framkvæmt með því að nota jarðvegsbakteríuna Agrobacterium tumefaciens , sem virkar sem vektor og setur stórt plasmíð inn í hýsilfrumuna. Aðeins þeir frumur sem innihalda klónunargervið mun vaxa þegar sýklalyf eru til staðar.
Helstu tegundir af klónarvektum
Helstu tegundir vektoranna eru:
- Plasmíð. Hringlaga utanfrumukrabbamein DNA sem endar sjálfstætt innan bakteríufrumunnar. Plasmaíðir hafa yfirleitt hátt afrita númer, svo sem pUC19 sem hefur afrita 500-700 eintök á hvern klefi.
- Phage. Línuleg DNA sameindir úr lambda bakteríuflogi. Hægt að skipta útlendum DNA án þess að trufla líftíma hans.
- Cosmids. Önnur hringlaga útdráttarmeðferð DNA sameind sem sameinar eiginleika plasmíða og faag.
- Bakterískar gervilínur. Byggt á bakteríum lítill-F plasmíðum.
- Ger gervi litningarefni. Þetta er tilbúið litningi sem inniheldur telómera (einnota bólusetningar í endum litninganna sem eru skorin niður við frumuskiptinguna) með uppruna replikunar, gistamiðja (hluti af litningi sem tengir systurskromatíð eða dúkur) og valkvætt merki til að bera kennsl á gervifrumur.
Human Artificial Litning. Þessi tegund af vektor er hugsanlega gagnlegt til að gefa gen í frumur manna og tæki til tjáningarrannsókna og ákvarða litningahreyfingu manna. Það getur borið mjög stórt DNA brot.
Allar verkfræðilegar vigrar hafa uppruna afritunar (replicator), klónunarsvæði (staðsett þar sem innsetning erlendra DNA hvorki truflar endurtekningu eða óvirkjun á nauðsynlegum merkjum) og valkvætt merki (oftast gen sem veitir sýklalyfjum ónæmi).